氣相色譜峰拖尾、響應(yīng)低甚至不出峰的主要原因
更新更新時(shí)間：2019-06-25
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A) 系統(tǒng)污染、惰性下降
系統(tǒng)惰性不好對(duì)活性組分峰形及響應(yīng)的影響尤為明顯。建議選用惰性?xún)?yōu)異的低流失氣相色譜柱和色譜耗件，如去活的襯管。如果系統(tǒng)已經(jīng)被污染，應(yīng)及時(shí)對(duì)進(jìn)樣口和檢測(cè)器進(jìn)行維護(hù)。恢復(fù)被污染色譜柱的方法主要有：
將進(jìn)樣口端截去 0.5~1 米，根據(jù)樣品來(lái)源做進(jìn)一步的判斷，如果是半揮發(fā)污染物，還可以進(jìn)一步考慮對(duì)色譜柱進(jìn)行老化。
污染嚴(yán)重時(shí)可截去更長(zhǎng)或用溶劑*清洗色譜柱（必需是交聯(lián)鍵合固定相）
B) 色譜柱安裝不正確或系統(tǒng)其他部位存在死體積
毛細(xì)管柱在進(jìn)樣口和檢測(cè)器的安裝位置不當(dāng)將影響峰形，請(qǐng)嚴(yán)格按照儀器的使用說(shuō)明正確安裝色譜柱。其他與毛細(xì)管柱相連接的部位也應(yīng)注意降低死體積。
C) 系統(tǒng)漏氣
需定期檢查系統(tǒng)氣密性、更換進(jìn)樣口備件。使用非純石墨密封圈時(shí)，注意安裝后的幾次溫度升降之后追加一次擰緊。
D) 方法條件不佳
對(duì)于低揮發(fā)性樣品，需注意提高進(jìn)樣口和/或檢測(cè)器、色譜柱、傳輸管線等處的溫度，防止冷凝現(xiàn)象。
有些樣品在某些檢測(cè)器的響應(yīng)確實(shí)不高（甚至沒(méi)有響應(yīng)），如果樣品不出峰，又沒(méi)有參考響應(yīng)值，應(yīng)加大進(jìn)樣量確認(rèn)出峰位置，并利用標(biāo)樣考查樣品的響應(yīng)值。
E) 其他可能導(dǎo)致峰拖尾的原因：
1 不分流模式下，分流放空閥開(kāi)啟過(guò)晚（通常應(yīng)在 0.5~1.0 分鐘之間）
2 手動(dòng)進(jìn)樣速度過(guò)慢
3 檢測(cè)器尾吹氣流量不足
4 PLOT 色譜柱樣品過(guò)載
5 組分共流出
6 含磷化合物在 NPD 白色銣珠上易拖尾，建議使用黑色銣珠。
A) 正確的安裝，好的開(kāi)始是成功的一半！
1 區(qū)分進(jìn)樣口端與檢測(cè)器端，鐵標(biāo)簽上的字正對(duì)安裝者。
2 確保進(jìn)樣口的潔凈度，如有污染，請(qǐng)更換襯管和分流平板。
3正確切割KB毛細(xì)管柱
4 安裝之后做好氣相色譜柱配置（EPC 系統(tǒng)，輸入色譜柱規(guī)格后，請(qǐng)進(jìn)行柱長(zhǎng)校正）
5對(duì)新色譜柱進(jìn)行適度老化
B) 正確的使用
1 請(qǐng)勿劃傷色譜柱表面的聚酰亞胺涂層，因此不要將色譜柱與尖銳的表面直接接觸。
2 注意色譜柱盒包裝側(cè)面的溫度上下限。
舉例：KB-5MS, 30m×0.25mm×0.25μm，溫度限為-60 o C 至 325 o C/350 o C。三個(gè)溫度從左
到右的含義分別是：
溫度下限：低于此溫度使用可以導(dǎo)致柱效下降，但對(duì)色譜柱沒(méi)有損害。
恒溫溫度上限：恒溫使用色譜柱時(shí)，此溫度為******上限。
程序升溫溫度上限：程序升溫使用此色譜柱時(shí)，可升至此溫度，但不可超過(guò) 15 分鐘。
1 確保密封無(wú)漏氣 (使用純度高的載氣，新的進(jìn)樣隔墊，規(guī)格合適的密封圈都是必需的)
2 做好樣品前處理，防止將不揮發(fā)的物質(zhì)及對(duì)色譜柱傷害較大的化合物(如：無(wú)機(jī)酸和堿)
引入色譜柱中，如果無(wú)法將這此物質(zhì)在進(jìn)樣前除去，請(qǐng)?jiān)诜治鲋敖颖Ｗo(hù)柱。
C) 氣相色譜柱正確的保存
1 氣相色譜柱不使用時(shí)，請(qǐng)從 GC 上卸下，并用舊的密封隔墊將其兩端封住。下一次使用時(shí)，需要把色譜柱兩端修整掉 2-4cm，以確保隔墊碎屑不會(huì)堵塞色譜柱。
2 如果把色譜柱留在加熱的 GC 中，一定要保證始終有載氣通過(guò)氣相色譜柱。
氣相色譜儀啟動(dòng)后不久或氣相色譜柱更換后不久，噪聲是不可避免的，這是正常現(xiàn)象。噪聲過(guò)大是指比正常的標(biāo)準(zhǔn)高得多的噪聲或某些不正常的突變。
注意：發(fā)現(xiàn)噪聲過(guò)大時(shí)，請(qǐng)先檢查氣相色譜儀和積分儀使用的電網(wǎng)電源是否有異常波動(dòng)或突變，特別是在同一電網(wǎng)電源上接有大功率裝置時(shí)，更要注意。此外，請(qǐng)檢查儀器的接地是否正確并且良好。
A.改變量程范圍，噪聲的大小還是基本不變時(shí)，要考慮是否信號(hào)線的故障、放大器電路板的故障、輸出信號(hào)線的故障、積分儀的故障。
B.將火焰熄滅之后噪聲如果還是很大，要考慮從檢測(cè)器到放大器電路板這一段是否存在問(wèn)題，請(qǐng)進(jìn)行下列項(xiàng)目的檢查：
1).檢查檢測(cè)器的噴嘴、收集極、離子信號(hào)線插座、點(diǎn)火線等部分是否固定可靠，請(qǐng)排除接觸不良的可能。
2).檢查檢測(cè)器是否被污染，如果污染請(qǐng)進(jìn)行清洗。
3).要考慮是極化電壓、放大器電路板、工作電源的故障。
C.將火焰熄滅之后噪聲如果降低或消失，要考慮是否檢測(cè)器本身產(chǎn)生過(guò)大噪聲：
1).檢查是否使用的氣體純度太低，請(qǐng)更換氣體或使用氣體過(guò)濾器去除氣體中的雜質(zhì)。
2).檢查檢測(cè)器是否被污染，如果污染請(qǐng)進(jìn)行清洗。
3).檢查空調(diào)器等冷暖設(shè)備的排風(fēng)是否正對(duì)著氣相色譜儀，請(qǐng)改變風(fēng)向或更換儀器的位置。
D.降低進(jìn)樣口溫度后如果噪聲變小，要考慮是否進(jìn)樣口有污染現(xiàn)象。
E.降低氣相色譜柱溫度后如果噪聲變小，要考慮是否載氣純度不夠或色譜柱的老化不足，請(qǐng)更換載氣或使用氣體過(guò)濾器去除載氣體中的雜質(zhì)，并對(duì)色譜柱進(jìn)行老化。
氣相色譜儀（柱）的選擇
F.如果需要更換氣相色譜儀，氣相色譜柱。
1、毛細(xì)管柱載氣流量的選擇
通過(guò)毛細(xì)管柱的載氣流量要根據(jù)毛細(xì)管柱的柱長(zhǎng)、柱徑、膜厚以及被分析物的組成等綜合因素設(shè)定。高流速雖然可以提高分析效率，但有時(shí)可能會(huì)因被測(cè)物與固定相之間交換不充分而降低柱效。因此，在實(shí)際分析中，流速的設(shè)定應(yīng)在滿足分離的前提下適當(dāng)增加，以提高分析效率。對(duì)于氣相色譜-質(zhì)譜儀，還要考慮質(zhì)譜真空泵的抽氣量，氣流速大還會(huì)影響到靈敏度。
某些檢測(cè)器，如電子捕獲檢測(cè)器，僅靠通過(guò)毛細(xì)管色譜柱的載氣流量無(wú)法滿足工作需求，因此，還需要補(bǔ)充加上尾吹氣。另外，有些廠家的儀器采用在毛細(xì)管柱的末端加上尾吹氣的設(shè)計(jì)，以減少擴(kuò)散，改善色譜峰形，提高信噪比。
2、毛細(xì)管柱柱溫的選擇
柱溫是影響色譜分離和分析效率的***重要參數(shù)，所以要根據(jù)分析目的和被測(cè)物性質(zhì)，如：被測(cè)物的沸點(diǎn)、被測(cè)物極性、被測(cè)組分的多少，通過(guò)實(shí)驗(yàn)優(yōu)化得到合適的柱溫。交聯(lián)型毛細(xì)管色譜柱相對(duì)而言柱流失比較少，可以在較高溫度下工作。分析中通常采用程序升溫模式，從而提高分離度和柱效。
(1) 初始溫度的選擇
初溫的確定取決于譜圖上***早流出峰的分離度，一般應(yīng)低于樣品中******沸點(diǎn)組分的溫度。
(2) 升溫速率的選擇
升溫速率對(duì)色譜分離度和峰形的影響******，對(duì)于多組分分析，可以設(shè)置多階、不同升溫速率的升溫程序，以得到******的分離效果和峰形。
(3) 終點(diǎn)溫度的選擇
程序升溫***終溫度的確定主要取決于固定相和被測(cè)樣品中******沸點(diǎn)的物質(zhì)。另外，對(duì)于基質(zhì)復(fù)雜的樣品，可以考慮在固定相規(guī)定******溫度下適當(dāng)提高溫度（但接質(zhì)譜******不要這樣做），并且在此溫度下適當(dāng)延長(zhǎng)保持時(shí)間。
3、進(jìn)樣方式的選擇
對(duì)于毛細(xì)管色譜分析有多種進(jìn)樣方式可以選擇。殘留分析應(yīng)選擇不分流進(jìn)樣或柱上進(jìn)樣，純度分析則多選擇分流進(jìn)樣，分流比根據(jù)被測(cè)物含量而定。但分流進(jìn)樣對(duì)定量精度會(huì)有影響，分流比越大定量精度越差。
4、毛細(xì)管柱的選擇
固相萃取裝置是一種被廣泛應(yīng)用且備受歡迎的樣品前處理技術(shù),就是利用固體吸附劑將液體樣品中的目標(biāo)化合物吸附,與樣品的基體和干擾化合物分離,然后再用洗脫液洗脫或加熱解吸附,達(dá)到分離和富集目標(biāo)化合物的目的。它在傳統(tǒng)的液—液萃取基礎(chǔ)上采用物質(zhì)間相似作用的相似相溶原理并結(jié)合目前廣泛應(yīng)用的液相色譜和氣相色譜固定相基本知識(shí)發(fā)展而來(lái)。
三種固相萃取柱的操作方法介紹：
一、反相萃取柱操作
從極性基體中提取非極性的樣品
1、活化：以3—5毫升甲醇淋洗萃取柱;以3—5毫升去離子水(或緩沖液)淋洗萃取柱并保持萃取柱濕潤(rùn)
2、上樣：以合適的流速使樣品均勻通過(guò)萃取柱
3、清洗：以5毫升適當(dāng)極性的溶劑洗脫吸附樣品的萃取柱(常用的有純水,緩沖液,水/有機(jī)溶劑混合液)
4、洗脫：將被測(cè)樣品,用1—5毫升非極性溶劑分批洗脫至收集容器
二、正相萃取柱操作
從非極性基體中提取極性的樣品
1、活化：3—5毫升非極性溶劑淋洗萃取柱
2、清洗：以5毫升適當(dāng)非極性的溶劑洗脫吸附樣品的萃取柱
3、洗脫：將被測(cè)樣品,用1—5毫升極性溶劑分批洗脫至收集容器
三、離子交換萃取柱
提取帶電荷的樣品
1、活化：以3—5毫升去離子水/或低離子強(qiáng)度的緩沖液淋洗萃取柱
2、上樣：以較低的流速,使樣品均勻通過(guò)萃取柱
3、清洗：5毫升去離子水/或低離子強(qiáng)度的緩沖液淋洗萃取柱
4、洗脫：將被測(cè)樣品,用1—5毫升高離子強(qiáng)度的緩沖液洗脫至收集容器
四、固相萃取柱的選擇
固相萃取柱目錄：
1：石墨化炭及復(fù)合S系列(農(nóng)殘)，固相萃取柱
2：聚合物基質(zhì)S系列(HLB-MCX-MAX-WCX-WAX)固相萃取柱
3：硅膠基質(zhì)正相S系列(硅膠-氟硅土-氧化鋁-Diol-PSA-氨基)固相萃取柱
4：硅膠基質(zhì)離子交換S系列(SAX-SCX-PRS)固相萃取柱
5：硅膠基質(zhì)反相S系列（C18-C8-CN)固相萃取柱
6：前處理及分析應(yīng)用（固相萃?。┕滔噍腿≈?/span>
7：C8-SCX-SAX混合S系列（藥物代謝及濫用)固相萃取柱
離子色譜是液相色譜的一種，故又稱(chēng)離子色譜（HPIC）或現(xiàn)代離子色譜，其有別于傳統(tǒng)離子交換色譜柱色譜的主要是樹(shù)脂具有很高的交聯(lián)度和較低的交換容量，進(jìn)樣體積很小，用柱塞泵輸送淋洗液通常對(duì)淋出液進(jìn)行在線自動(dòng)連續(xù)電導(dǎo)檢測(cè)。
離子色譜儀的使用：
1、流動(dòng)相瓶中濾頭要注意始終處于液面以下，防止將溶液吸干。
2、啟動(dòng)泵前觀察從流動(dòng)相瓶到泵之間的管路中是否有氣泡，如果有則應(yīng)將其排除。
排除方法如下：先將與泵相連的塑料流路接頭擰下來(lái)，用洗耳球吸滿去離子水，從與泵段相連的流路管中注入，將流路管中的氣泡排除干凈。然后再將流動(dòng)相瓶(一般為去離子水瓶)抬高，再將流路接頭與泵連接好。啟動(dòng)泵，打開(kāi)泵內(nèi)排氣閥選鈕，將泵內(nèi)氣泡排除干凈，一般觀察為流出液比較均勻，再將泵排氣閥擰緊。(注意：此項(xiàng)操作時(shí)，整個(gè)流路是與色譜柱斷開(kāi)的)
3、用去離子水或流動(dòng)相清洗整個(gè)流路時(shí)，可以采用大流量清洗(一般可將流量設(shè)置為2.0ml/min，但不能再太大)以縮短清洗時(shí)間，但在通流動(dòng)相接色譜柱時(shí)需要將流量調(diào)整為色譜柱使用流量條件。
操作如下：先將泵停止，再按動(dòng)正號(hào)或負(fù)號(hào)，將光標(biāo)調(diào)整至流量位置，按下確認(rèn)鍵，再通過(guò)調(diào)節(jié)正負(fù)號(hào)將流量調(diào)節(jié)至色譜柱使用條件后，再按確認(rèn)鍵。此時(shí)需要等待5s后再啟動(dòng)泵開(kāi)關(guān)。接色譜柱時(shí)注意先將接頭在色譜柱前端抵上2-5s，將色譜柱前端氣泡排除后再將接頭擰緊。待色譜柱下端流出溶液后，在將色譜柱下端接頭擰上。(注意：接頭不能擰的太緊，防止將管路卡的太緊而造成系統(tǒng)壓力增大，擰的程度以不漏液為宜)
4、使用陰離子色譜柱檢測(cè)，通流動(dòng)相時(shí)注意將電流旋鈕打開(kāi)，調(diào)節(jié)至90-100mA，使用完畢后要將電流旋鈕關(guān)閉。
5、進(jìn)樣時(shí)閥的扳動(dòng)要注意，不能太快，以免損傷閥體;也不能太慢，以免造成樣品流失。在進(jìn)樣過(guò)程中，要嚴(yán)格按清洗程序操作，以減小前次樣品殘留對(duì)本次檢測(cè)的影響。
隨著人們對(duì)產(chǎn)品質(zhì)量意識(shí)的日益加強(qiáng)，化學(xué)分析儀器的自動(dòng)化程度不斷提高，化驗(yàn)室中分析天平的使用也越來(lái)越廣泛了。電子分析天平雖操作簡(jiǎn)單，但日常維護(hù)也是*的。日常要注意以下幾點(diǎn)：
1、將天平置于穩(wěn)定的工作臺(tái)上，避免振動(dòng)、氣流及陽(yáng)光照射，防止腐蝕性氣體的侵蝕。高精度的電子天平要滿足說(shuō)明書(shū)要求的溫度和濕度波動(dòng)的條件，才能達(dá)到規(guī)定的稱(chēng)量準(zhǔn)確度要求。
2、稱(chēng)量易揮發(fā)和具有腐蝕性的物品時(shí)，要盛放在密閉的容器中，以免腐蝕和損壞電子天平。
3、秤盤(pán)和外殼可以用軟布輕輕擦凈，切不可用強(qiáng)溶劑擦洗。
4、防止超載，注意被稱(chēng)物體的質(zhì)量應(yīng)在天平的******載量以?xún)?nèi)，電子天平大多都有保護(hù)裝置，但超載可能會(huì)損壞天平!
5、較長(zhǎng)時(shí)間不使用的天平，應(yīng)每隔一定時(shí)間通一次電，以保證電子元器件的干燥。電子天平搬動(dòng)和運(yùn)輸時(shí)應(yīng)將秤盤(pán)和托盤(pán)取下。
6、稱(chēng)量室不要放置干燥劑，因?yàn)楦稍飫┑奈头潘纬闪瞬煌较虻臍饬?，引起空氣浮力的變化，?dǎo)致稱(chēng)量不穩(wěn)定。
7、經(jīng)常對(duì)電子天平進(jìn)行自?；蚨ㄆ谕庑＃ＷC其處于******狀態(tài)。
由于分光光度計(jì)是一種常用的實(shí)驗(yàn)室分析儀器，所以無(wú)論是從款式上還是價(jià)格上五花八門(mén)，一般往往給初購(gòu)者造成眼花繚亂、令人無(wú)所適從的感覺(jué)；價(jià)格因素一般是購(gòu)買(mǎi)者首先考慮的問(wèn)題，盡管分光光度計(jì)種類(lèi)繁多，但不外乎：簡(jiǎn)易型、中檔型和型三大類(lèi)：
(1)簡(jiǎn)易型儀器及其特點(diǎn)：
結(jié) 構(gòu)：這種類(lèi)型的儀器多為單光束型，即只有一束光照射到樣品室內(nèi)；光源一般僅有鎢燈；樣品支架一般為推拉式四聯(lián)池架；波長(zhǎng)選擇多為手動(dòng)查找，重復(fù)性差；狹縫為一個(gè)固定寬度模式；光學(xué)性能指標(biāo)較低；檢測(cè)器多為光敏二極管；顯示器多為機(jī)械表頭或數(shù)碼管顯示器，數(shù)據(jù)處理器一般沒(méi)有。此類(lèi)儀器生產(chǎn)以國(guó)內(nèi)廠家居多。測(cè)量模式：多為定點(diǎn)(固定波長(zhǎng))吸光度或透過(guò)率測(cè)量方式，基本不能進(jìn)行波長(zhǎng)掃描測(cè)量。適應(yīng)范圍：小型實(shí)驗(yàn)室及示范教學(xué)，分析樣品相對(duì)簡(jiǎn)單，測(cè)試結(jié)果精度要求不高。
(2)中檔型儀器及其特點(diǎn)：
結(jié) 構(gòu)：此類(lèi)儀器多為雙光束型或準(zhǔn)雙光束型，但也有單光束儀器型；光源有鎢燈和氘燈；樣品池支架為兩個(gè)固定式，分別是樣品通道和參比通道；波長(zhǎng)按照設(shè)定模式自動(dòng)查找或掃描；狹縫多數(shù)仍為2nm固定寬度模式,也有1.5nm狹縫寬度的；檢測(cè)器多數(shù)是硅光二極管，但也有少數(shù)用光電倍增管的；光學(xué)性能相對(duì)較高，其中光柵的技術(shù)指標(biāo)尤為重要，******的光柵為凹面型，為此無(wú)論在分辨率還是在雜散光方面指標(biāo)要優(yōu)于簡(jiǎn)易型儀器；顯示器為液晶式或連接電腦，數(shù)據(jù)處理可由儀器自身具有的或外接計(jì)算機(jī)處理。并有一定的測(cè)量附件。測(cè)量模式：透過(guò)率、吸光度、濃度直讀、單光束;單點(diǎn)及掃描均可。適應(yīng)范圍：此類(lèi)儀器基本可滿足大多實(shí)驗(yàn)室分析需要。
(3)型儀器及特點(diǎn)：
結(jié)構(gòu)：除了中檔儀器的特點(diǎn)外，主要是光學(xué)系統(tǒng)的設(shè)計(jì)和制造工藝水平更高了，比如使用了大尺寸的凹面光柵，并且光柵刻槽數(shù)大于1800條/mm;波長(zhǎng)檢測(cè)范圍有的儀器在近紅外區(qū)已經(jīng)超過(guò)1100nm，可達(dá)到2600nm;狹縫均為連續(xù)可調(diào)型，以適應(yīng)高分辨率的需要，波長(zhǎng)掃描速度的檔位也增加了，檢測(cè)器均使用高靈敏度的光電倍增管和紅外檢測(cè)器;數(shù)據(jù)處理目前基本是電腦來(lái)執(zhí)行;衡量一臺(tái)儀器的另外一個(gè)指標(biāo)是看此儀器是否具有豐富的附屬測(cè)量器件，如偏振附件、積分球附件、反射附件、自動(dòng)進(jìn)樣器附件、色度分析軟件、薄膜附件等等。測(cè)量模式：透過(guò)率、吸光度、濃度直讀、反射方式、能量方式，單點(diǎn)、掃描均可;適應(yīng)范圍：科研、光學(xué)產(chǎn)品的檢測(cè)、生化樣品檢測(cè)、復(fù)雜樣品檢測(cè)等。不但可以測(cè)液態(tài)樣品，也可測(cè)固態(tài)樣品。
色譜分析過(guò)程中，緩沖液是*的，因?yàn)橐盟鼇?lái)調(diào)節(jié)流動(dòng)相的pH值，緩沖鹽使用不當(dāng)，后果可是吃不了兜著走。比如說(shuō)，色譜柱壓升高、柱效下降、保留時(shí)間異常等等不良影響、
1）柱壓升高；
原因、緩沖鹽使用不當(dāng)導(dǎo)致緩沖鹽析出，堵塞塞板和鍵合相顆粒之間的孔隙，阻礙流動(dòng)相傳質(zhì)，引起柱壓升高。
2）相同化合物的保留時(shí)間發(fā)生變化；
原因、如果沒(méi)有沖洗干凈就進(jìn)行進(jìn)樣，色譜柱內(nèi)含有的鹽會(huì)使化合物的保留時(shí)間發(fā)生變化.
3）色譜柱柱效下降；
原因、
1）有些緩沖鹽會(huì)滲入到鍵合相的深處，損害硅膠基體，導(dǎo)致色譜柱鍵合相流失，柱床變松，柱效下降；
2）凝結(jié)在鍵合相表面，使C18碳鏈難以舒展，對(duì)物質(zhì)的保留能力下降，導(dǎo)致柱效下降。因此用過(guò)緩沖鹽后需要對(duì)色譜柱進(jìn)行沖洗，水中緩沖鹽濃度較大時(shí)應(yīng)特別引起注意。
使用前和使用后的處理：
1、使用前的處理:
在使用緩沖鹽作流動(dòng)相之前需要用不含緩沖鹽的流動(dòng)相沖洗色譜柱，直至基線平穩(wěn)。原則上，用于沖洗的流動(dòng)相與分析時(shí)所用的流動(dòng)相含水的比例相同（或含水更多），不同的只是用于沖洗用的流動(dòng)相中不含緩沖鹽。理由、緩沖鹽通常易溶于水，難溶于有機(jī)溶劑。用含緩沖鹽的（特別是做流動(dòng)相的水為飽和的緩沖鹽溶液時(shí)）流動(dòng)相進(jìn)行分析時(shí)，如果分析前色譜柱中用于保存色譜柱的流動(dòng)相中含水的比例相對(duì)較小，不先沖洗掉，接下來(lái)做樣品的時(shí)候所用的流動(dòng)相中如果有機(jī)溶劑含量大，而其比例中所含的水又不足以溶解該緩沖鹽時(shí)，緩沖鹽將會(huì)在色譜柱柱體上析出，沉積下來(lái)，這將可能導(dǎo)致上述對(duì)色譜柱的損害.
2、使用后的處理：
用與分析時(shí)含水比例相同的流動(dòng)相（與分析用流動(dòng)相******的區(qū)別是，用于沖洗的流動(dòng)相不含緩沖鹽）進(jìn)行沖洗約30min，直至基線平穩(wěn)。如果該色譜柱在接下來(lái)很長(zhǎng)的一段時(shí)間內(nèi)不使用，要長(zhǎng)期保存，則需再加上一步，即用純的有機(jī)溶劑沖洗一遍，直至基線平穩(wěn)。
用與分析時(shí)含水比例相同的流動(dòng)相（與分析用流動(dòng)相******的區(qū)別是，用于沖洗的流動(dòng)相不含緩沖鹽）進(jìn)行沖洗約30min，直至基線平穩(wěn)。如果該色譜柱在接下來(lái)很長(zhǎng)的一段時(shí)間內(nèi)不使用，要長(zhǎng)期保存，則需再加上一步，即用純的有機(jī)溶劑沖洗一遍，直至基線平穩(wěn).緩沖液可以提供離子平衡的反離子，并使流動(dòng)相保持一定的離子強(qiáng)度和ph值，減少拖尾。
3.使用注意事項(xiàng):
1、避免使用鹽酸鹽，鹽酸鹽對(duì)鋼質(zhì)有腐蝕作用。
2、緩沖液******要現(xiàn)配現(xiàn)用，往往緩沖液是良好的菌類(lèi)培養(yǎng)液，隔天或放置長(zhǎng)時(shí)間實(shí)驗(yàn)時(shí)會(huì)有很多怪現(xiàn)象發(fā)生。
3、實(shí)驗(yàn)后不可用有機(jī)溶劑直接過(guò)度，有機(jī)溶劑會(huì)處使鹽類(lèi)析出，造成液路或色譜柱堵塞，可用95、5的水甲醇沖洗。
4、使用緩沖液要及時(shí)掌握ph范圍，做到胸中有數(shù)。
5、清洗液路和柱子時(shí)，有溫控可加熱到30攝氏度易于沖洗。
6、長(zhǎng)時(shí)間用緩沖溶液要注意觀察接頭處有無(wú)析出，若有白色鹽類(lèi)析出，可考慮一定周期用10%硝酸沖洗一下液路（拆下柱子，走30ml,再用5倍水沖洗）可以避免液路的堵塞。
7、選擇緩沖液要用可靠的試劑，避免不純的鹽類(lèi)造成不必要的麻煩。
如果流動(dòng)相中有機(jī)溶劑的比例很高是不能用來(lái)沖洗緩沖鹽的，是洗不出來(lái)的。通常賽分C18色譜柱先用5%~10%的甲醇沖洗，是可以把緩沖鹽沖洗出來(lái)的，然后用純的有機(jī)溶劑來(lái)保護(hù)柱子。******的方法是使用與流動(dòng)相相同濃度不含鹽的流動(dòng)相進(jìn)行清洗。但就是速度慢一些。用水是為了快速替換，一般在15分鐘以?xún)?nèi)******，且用0.8的流速較好.如果用純水沖，容易造成鍵合的碳鏈的流失，******用5%~10%甲醇水溶液沖.可以用純水代替流動(dòng)相中的緩沖液，有機(jī)相不變。這樣沖洗柱子比較穩(wěn)妥。
8、實(shí)驗(yàn)室耗材色譜柱的選擇
1 如果需要購(gòu)買(mǎi)色譜柱，或者是查看更多關(guān)于色譜柱技術(shù)方面的問(wèn)題。
液相色譜儀是屬于易學(xué)難用的儀器，特別講究“正確使用”和經(jīng)驗(yàn)。液相工作者接觸***多的是流動(dòng)相，也就是流動(dòng)相，是造成液相色譜各種問(wèn)題的***主要源頭。做好液相色譜儀的正確操作，能極大的降低故障率，減少維修和停機(jī)成本。下面就來(lái)說(shuō)一說(shuō)在液相色譜儀使用中的注意事項(xiàng)。
一、泵是液相色譜儀的心臟。處于良好工作狀態(tài)的泵，基線平穩(wěn)，保留時(shí)間重現(xiàn)性好，梯度洗脫時(shí)壓力變化緩慢而且平穩(wěn)。泵的使用要注意：
1.選擇的溶劑和試劑，在進(jìn)入儀器前用 0.45um MS過(guò)濾膜過(guò)濾，并進(jìn)行脫氣處理。
2.泵開(kāi)始使用時(shí)，一定要用合適的流動(dòng)相*清洗干凈。
3.定期檢查并更換在線過(guò)濾片及有關(guān)的墊圈，經(jīng)常清洗進(jìn)液處的微孔濾頭。
4.改變流動(dòng)相時(shí)，應(yīng)注意沉淀的產(chǎn)生，以防止泵堵塞。
二、液相色譜法對(duì)液相色譜柱的要求是柱效高、選擇性好，分析速度快等。PS（推薦使用賽分色譜柱）所以說(shuō)色譜柱的正確使用和維護(hù)十分重要，稍有不慎就會(huì)降低柱效、縮短使用壽命甚至損壞。在色譜操作過(guò)程中，要注意下列問(wèn)題，以維護(hù)色譜柱。
1.避免壓力和溫度的急劇變化及任何機(jī)械震動(dòng)。溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會(huì)影響柱內(nèi)的填充狀況。因此在安裝時(shí)要輕拿輕放。
2.色譜柱PH使用范圍是2.0-9.0。當(dāng)使用PH值范圍邊界時(shí)，分析結(jié)束立即用與所使用流動(dòng)相互溶的溶劑*清洗置換流動(dòng)相。
3.每次分析結(jié)束后，都要對(duì)色譜柱進(jìn)行沖洗。每次工作完后，******用洗脫能力強(qiáng)的洗脫液沖洗，例如ODS柱宜用甲醇沖洗至基線平衡。當(dāng)采用鹽緩沖溶液作流動(dòng)相時(shí)，使用完后應(yīng)用無(wú)鹽流動(dòng)相沖洗。
4.若長(zhǎng)時(shí)間不用該色譜柱，要沖洗好后，用純甲醇或乙腈封存。
三、檢測(cè)器是液相色譜的大腦，起著至關(guān)重要的作用。如何更好地發(fā)現(xiàn)和排除檢測(cè)器故障是液相色譜使用的*技能。
1、檢測(cè)器是液相色譜儀器的數(shù)據(jù)收集部分，由很多的電子和光學(xué)元件組成。禁止拆卸更動(dòng)儀器內(nèi)部元件防止損壞或影響準(zhǔn)確度。
2、儀器內(nèi)部的流通池是流動(dòng)相流過(guò)的元件，樣品的干凈程度和微生物的生長(zhǎng)都可能污染流通池，導(dǎo)致無(wú)法檢測(cè)或檢測(cè)結(jié)果不準(zhǔn)，所以在使用了一段時(shí)間以后要先用水沖洗流通池和管路再換有機(jī)溶劑沖洗。
3、當(dāng)儀器檢測(cè)數(shù)據(jù)出現(xiàn)明顯波動(dòng)，基線噪音變大時(shí)要沖洗儀器管路，沖洗后如果還是沒(méi)有改善就應(yīng)該檢測(cè)氘燈能量，如果能量不足就因更換新的氘燈。
4、儀器在每次使用完了以后都要用水和一定濃度的有機(jī)溶劑沖洗管路，保證下次使用時(shí)管路和系統(tǒng)的清潔。
固相萃取實(shí)質(zhì)上是一種液相色譜分離，其主要分離模式也與液相色譜相同，可分為正相（吸附劑極性大于洗脫液極性），反相（吸附劑極性小于洗脫液極性），離子交換和吸附。固相萃取所用的吸附劑也與液相色譜常用的固定相相同，只是在粒度上有所區(qū)別。
正相固相萃取的特點(diǎn)
固相萃取是一種用途廣泛而且越來(lái)越受歡迎的樣品前處理技術(shù)。S是利用固體吸附劑將液體樣品中的目標(biāo)化合物吸附，與樣品的基體和干擾化合物分離，然后再用洗脫液洗脫或加熱解吸附，達(dá)到分離和富集目標(biāo)化合物的目的。因其具有安全、回收率高，重現(xiàn)性好、操作簡(jiǎn)便、快速、應(yīng)用范圍廣、易實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化操作等特點(diǎn)。
固相萃取方法的選擇
固相萃取技術(shù)的分離模式有多種，具體使用哪種方法，主要取決于待處理樣品的相對(duì)分子質(zhì)量(Mr)及樣品的性質(zhì)。
1.選擇固相萃取應(yīng)考慮的問(wèn)題：
(1)待測(cè)物的化學(xué)性質(zhì):功能基團(tuán)、能否離子化，是水溶性還是脂溶性。
(2)基質(zhì)的性質(zhì):pH值、離子強(qiáng)度、是水還是有機(jī)溶劑。
(3)類(lèi)似干擾物的性質(zhì)。
(4)待測(cè)物在樣品中的濃度。
(5)分析的檢測(cè)限及靈敏度。
(6)待測(cè)物是否需要富集、純化。
2.固定相的選擇(根據(jù)相似相溶原則來(lái)選擇固定相)：
S的固定相是樣品分離、純化的關(guān)鍵，由于固定相關(guān)系到S的重復(fù)性、回收率、靈敏度、特異性，因此S的吸附劑一直是人們關(guān)注的熱點(diǎn)。自S發(fā)明以來(lái)，聚合樹(shù)脂的樣品污染一直令人苦惱，因此，提供了C18鍵合硅膠制成一次性小柱，具有很高的可靠性和穩(wěn)定性，已廣泛應(yīng)用于臨床生化檢驗(yàn)。凡可用于HPLC的吸附劑均可用于S，包括近年來(lái)針對(duì)藥物濫用檢測(cè)的“designerphase”。吸附劑的選擇既要考慮樣品各組分與固定相的親和力、待測(cè)物與洗脫劑的作用力，還要考慮其通用性。
就目前化學(xué)鍵合相而言，非極性鍵合相有C1、C2、C4、C6、C8、環(huán)己烷基、苯基、二苯基、C18等;極性和弱離子交換相有:氰基、二醇基、氨基、伯胺/仲胺基、丁酸基;強(qiáng)離子交換相有:丙磺酸基、苯磺酸基、季銨基等;吸附樹(shù)脂有:XAD-2、GDX、X-5。具有選擇專(zhuān)屬性的苯基磺酸可用于分離共平面連位羥基結(jié)構(gòu)分子。對(duì)于生物樣品，大多溶解在水性物質(zhì)里，待測(cè)物被離子化，用離子交換萃取分離極性很強(qiáng)的物質(zhì)，非極性或弱極性分析物用R-P提取，正相萃取用于提取有機(jī)溶劑中的極性物質(zhì)。吸附劑的用量必須保證從樣品中有效吸附所有的待測(cè)物，不保留基質(zhì)成分，增加吸附劑的量可增大吸附能力，但同時(shí)也增大洗脫體積，使待測(cè)物稀釋?zhuān)o干燥和定量帶來(lái)困難。因此在達(dá)到有效吸附的前提下用***小量的吸附劑。
什么是細(xì)胞培養(yǎng)皿
細(xì)胞培養(yǎng)皿是一種用于微生物或細(xì)胞培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)室器皿，由一個(gè)平面圓盤(pán)狀的底和一個(gè)蓋組成，一般用玻璃或塑料制成。它***初由在德國(guó)生物學(xué)家羅伯特·科赫手下工作的細(xì)菌學(xué)家朱利斯·理查德·佩特里（Julius Richard Petri，1852－1921）于1887年設(shè)計(jì)，故又稱(chēng)為“佩特里皿”。培養(yǎng)皿質(zhì)地脆弱、易碎，故在清洗及拿放時(shí)應(yīng)小心謹(jǐn)慎、輕拿輕放。使用完畢的培養(yǎng)皿******及時(shí)清洗干凈，存放在安全、固定的位置，防止損壞、摔壞。
細(xì)胞培養(yǎng)皿的清洗步驟
一般經(jīng)過(guò)浸泡、刷洗、浸酸和清洗四個(gè)步驟。
1.浸泡:新的或用過(guò)的玻璃器皿要先用清水浸泡，軟化和溶解附著物。新玻璃器皿使用前得先用自來(lái)水簡(jiǎn)單刷洗，然后用5%鹽酸浸泡過(guò)夜；用過(guò)的玻璃器皿往往附有大量蛋白質(zhì)和油脂，干涸后不易刷洗掉，故用后應(yīng)立即浸入清水中備刷洗。
2.刷洗:將浸泡后的玻璃器皿放到洗滌劑水中，用軟毛刷反復(fù)刷洗。不要留死角，并防止破壞器皿表面的光潔度。將刷洗干凈的玻璃器皿洗凈、晾干，備浸酸。
3.浸酸:浸酸是將上述器皿浸泡到清潔液中，又稱(chēng)酸液，通過(guò)酸液的強(qiáng)氧化作用清除器皿表面的可能殘留物質(zhì)。浸酸不應(yīng)少于六小時(shí)，一般過(guò)夜或更長(zhǎng)。放取器皿要小心。
4.沖洗:刷洗和浸酸后的器皿都必須用水充分沖洗，浸酸后器皿是否沖洗的干凈，直接影響到細(xì)胞培養(yǎng)的成敗。手工洗滌浸酸后的器皿，每件器皿至少要反復(fù)“注水－倒空”15次以上，***后用重蒸水浸洗2－3次，晾干或烘干后包裝備用。
液相色譜儀峰分叉怎么回事？
造成這種情況的原因一般是色譜柱被污染，或柱頭填料塌陷導(dǎo)致的。
對(duì)于******種情況，先用純水反向沖洗柱子，然后換成甲醇沖洗，接著用甲醇+異丙醇(4+6)沖洗柱子(沖洗時(shí)間的長(zhǎng)短由樣品污染的情況而定)，再換成甲醇沖洗，然后用純水沖洗，***后甲醇沖洗正向沖洗柱子30分鐘以上。如沖洗后依然出峰不佳，則考慮第二種情況。
對(duì)于第二種情況，擰開(kāi)柱頭，檢查柱填料是否硬結(jié)或塌陷。去除硬結(jié)部分(污染的填料)，裝入新填料，滴一滴甲醇，填料下陷，再填，用與柱內(nèi)徑相同的頂端平滑的不銹鋼桿壓緊，再填平，滴甲醇，再壓緊反復(fù)幾次，直至裝滿填平。柱頭用甲醇沖洗干凈，擦凈柱外壁的填料，擰緊柱頭，用純甲醇沖洗30分鐘以上。
如何排除液相色譜儀氣泡溢出故障？
流動(dòng)相內(nèi)產(chǎn)生都無(wú)法清除不斷產(chǎn)生的氣泡，主要是因?yàn)檫^(guò)濾器長(zhǎng)期沉浸于乙酸銨等緩沖液內(nèi)，過(guò)濾器內(nèi)部由于霉菌的生長(zhǎng)繁殖，形成菌團(tuán)，阻塞了過(guò)濾器，緩沖液難以流暢地通過(guò)過(guò)濾器，空氣在泵的壓力作用下經(jīng)過(guò)濾器進(jìn)入流動(dòng)相。
過(guò)濾器浸泡于5%硝酸溶液中，超聲清洗幾分鐘即可；亦可將過(guò)濾器浸泡于5%硝酸溶液中12～36小時(shí)，輕輕震蕩幾次，再將過(guò)濾器用純水清洗幾次，打開(kāi)泄壓閥，打開(kāi)purge鍵清洗脫氣，如仍有氣泡不斷從過(guò)濾器冒出，繼續(xù)將過(guò)濾器浸泡于5%硝酸溶液中，如沒(méi)有氣泡不斷從過(guò)濾器中冒出，說(shuō)明過(guò)濾器內(nèi)部的霉菌菌團(tuán)已被硝酸破壞，流動(dòng)相可以流暢地通過(guò)過(guò)濾器。打開(kāi)泄壓閥，打開(kāi)泵，流速調(diào)至1.0～3.0ml/min，純水沖洗過(guò)濾器1小時(shí)左右。即可將過(guò)濾器清洗干凈。關(guān)閉泄壓閥，純甲醇沖洗半小時(shí)即可。
自檢時(shí)有時(shí)會(huì)出現(xiàn)“鎢燈能量低”的錯(cuò)誤？
一般來(lái)說(shuō)，原因是系統(tǒng)中有擋光物，光路偏離，鎢燈電源系統(tǒng)或鎢燈燈泡已壞。這時(shí)首先要檢查光度室是否有擋光物；打開(kāi)檢測(cè)器光源室蓋，檢查氘燈是否點(diǎn)亮；如果氘燈不亮，則關(guān)機(jī)，更換新氘燈，換時(shí)，需注意型號(hào)；檢查氘燈保險(xiǎn)絲，看是否松動(dòng)、氧化、燒斷；如果故障，應(yīng)立即更換；再開(kāi)機(jī)重新自檢；若仍出現(xiàn)上述故障，則重新安裝軟件后再進(jìn)行自檢。
出現(xiàn)壓力波動(dòng)大，流量不穩(wěn)定？
造成這種情況的原因是系統(tǒng)中有空氣或者單向閥的寶石球和閥座之間夾有異物，使得兩者不能密封。處理工作中注意觀察流動(dòng)相的量，保證不銹鋼濾器沉入儲(chǔ)液器瓶底，避免吸入空氣，流動(dòng)相要充分脫氣。如為單向閥和閥座之間夾有異物，拆下單向閥，放入盛有丙酮的燒杯用超聲波清洗。
液相色譜儀峰面積重復(fù)性不好？
主要原因可能有進(jìn)樣閥漏液、加樣針不到位或液量不足。針對(duì)******種情況，處理時(shí)應(yīng)對(duì)更換進(jìn)樣閥墊圈；對(duì)于第二種情況保證加樣針插到底，注射樣品溶液后須快速、平穩(wěn)地從LOAD狀態(tài)轉(zhuǎn)換到INJECT狀態(tài)，以保證進(jìn)樣量的準(zhǔn)確。日常工作中，液相色譜儀的保養(yǎng)非常重要，如要注意不要讓空氣進(jìn)入輸液系統(tǒng)和高壓泵中，儲(chǔ)液器內(nèi)的溶液如長(zhǎng)時(shí)間未用應(yīng)清洗儲(chǔ)液器并更換溶液，每次用完色譜儀后緩沖液要用純水沖洗干凈，防止無(wú)機(jī)鹽析出或沉積；樣品的前處理也很重要，任何樣品都要盡可能地去除雜質(zhì)，*溶解，盡量減少對(duì)色譜柱的污染，以延長(zhǎng)色譜柱的使用壽命，同時(shí)避免注射過(guò)濃的樣品溶液，以免殘留液在進(jìn)樣閥內(nèi)析出固體引起堵塞；色譜柱作好標(biāo)記，用于不同分析目的的色譜柱不要混用等。
液相色譜柱壓升高？
造成柱壓升高的原因很多。一般是由于柱床內(nèi)產(chǎn)生了異常的占位性物體，造成流體阻力加大所引起的。例如，緩沖液鹽分如(乙酸銨等)沉積于柱內(nèi)，或樣品污染沉積。針對(duì)******種情況，處理時(shí)應(yīng)先用40～50℃的純水，低速正向沖洗柱子，待柱壓逐漸下降后，相應(yīng)提高流速?zèng)_洗，柱壓大幅度下降后，用常溫純水沖洗，之后用純甲醇沖洗柱子30分鐘；對(duì)于第二種情況，由樣品的沉積引起污染的C18柱，和純水反向沖洗柱子，然后換成甲醇沖洗，接著用甲醇+異丙醇(4+6)沖洗柱子(沖洗時(shí)間的長(zhǎng)短由樣品污染的情況而定)，再用換成甲醇沖洗，然后用純水沖洗，***后甲醇沖洗正向沖洗柱子30分鐘以上
關(guān)于標(biāo)示：
1.液相色譜柱的流向不能改變
在我們常規(guī)思維中，色譜柱上標(biāo)示的流向是不可改變的，每次使用都要遵循?？墒牵蠹矣袥](méi)有想過(guò)這個(gè)方向的作用是什么呢？為什么要標(biāo)示一個(gè)使用方向呢？
其實(shí)色譜柱前后端的填料及填裝工藝都是一樣的，標(biāo)示方向的目的就是讓我們?cè)谑褂弥杏涀×鲃?dòng)相從哪個(gè)方向流入色譜柱，那么這個(gè)流入段就是***先污染端。這樣就為我們?nèi)蘸缶S護(hù)或再生色譜柱做了準(zhǔn)備，而我們需要遵循這個(gè)規(guī)定應(yīng)該在色譜柱開(kāi)始做樣后。
我曾將已經(jīng)污染過(guò)的色譜柱反方向來(lái)使用，如果保留時(shí)間不是很長(zhǎng)，而色譜柱足夠長(zhǎng)，還是能使用一段時(shí)間的。
2.不去看說(shuō)明書(shū)，直接就上機(jī)使用
色譜柱內(nèi)部保存著什么溶劑一定要看清楚，因此色譜柱的說(shuō)明書(shū)一定要看清楚，當(dāng)然也包括說(shuō)明書(shū)上建議的維護(hù)保養(yǎng)規(guī)定，對(duì)我們都非常的有用。對(duì)于反相柱來(lái)說(shuō)，溶劑基本就是乙腈或甲醇。但正相柱就不同了，因?yàn)檎嘀丝梢赃m用正相系統(tǒng)，也可以適用反相系統(tǒng)，因此一定要看清楚，對(duì)于你的方法來(lái)說(shuō)是否需要置換色譜柱內(nèi)部保存溶劑。
關(guān)于沖洗：
3.用純水沖洗色譜柱才能把緩沖液沖洗干凈
使用強(qiáng)溶劑沖洗色譜柱對(duì)內(nèi)部填料的損傷是******的，尤其是純水，除非你的色譜柱是耐水的。沖洗色譜柱******的方法是用流動(dòng)相比例的水系和有機(jī)系來(lái)沖洗。如果你認(rèn)為流動(dòng)相比例無(wú)法把色譜柱沖洗干凈或者此比例中有機(jī)系占有比例過(guò)大，你可以使用內(nèi)含10%左右的純水來(lái)沖洗。
關(guān)于保存：
4.保存在乙腈或甲醇中的新色譜柱可以直接使用
理論上液相色譜柱不同于氣相色譜柱需要活化，但是由于液相色譜柱內(nèi)部保存的有機(jī)系具有揮發(fā)性，因此在使用前還是應(yīng)該用小流速的和色譜柱內(nèi)部相同的溶劑沖洗一定的時(shí)間。可以是0.5ml/min，120min，但******咨詢(xún)廠家，根據(jù)色譜柱參數(shù)設(shè)定。
5.色譜柱應(yīng)該保存在純乙腈或甲醇中
根據(jù)第4條，色譜柱內(nèi)部保存液具有揮發(fā)性，因此為了減少其揮發(fā)速度，可以添加5%-10%的水，這樣的話可以在一定程度上減少一些有機(jī)系的揮發(fā)。如果再增加一個(gè)保險(xiǎn)，我們可以在堵緊堵頭后，再用封口膜封起來(lái)。同樣道理，色譜柱一段時(shí)間不用后，也應(yīng)該按照第4條，進(jìn)行小流速的沖洗色譜柱。
關(guān)于再生：
6.色譜柱污染后把篩板卸下來(lái)超聲清洗
對(duì)于色譜柱的污染，*的就是篩板，因此我們***常用的做法就是把柱頭卸下來(lái)，把篩板拿去超聲清洗。但是我們?cè)诓鹦哆^(guò)程中對(duì)色譜柱前端填料的損害遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于污染照成的傷害，因?yàn)槲覀儾皇菍?zhuān)業(yè)的。因此建議這一步能不做就不做。
7.自己填裝色譜柱
和第6條相同，這一步做法幾乎可以把此色譜柱判死刑了，我們的填裝工具有什么呢？就是手工的，其填裝壓力遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于工廠內(nèi)原始的填裝壓力。那么我們填裝的結(jié)果會(huì)是個(gè)什么樣也就很明顯了。
在我看來(lái)，自己填裝也就是練練手，熟悉一下這個(gè)過(guò)程，要把色譜柱維修好的可能性幾乎為零。
8.用異丙醇沖洗再生后，柱子效果更差了
這種情況我自己就遇到過(guò)，還好那根柱子本來(lái)就打算報(bào)廢了，因此也沒(méi)有照成多少損失。但是這是什么原因呢？其實(shí)很簡(jiǎn)單，就是在我反向沖洗前沒(méi)有把管路中的污染物沖洗干凈就直接接了柱子。所以說(shuō)，方法是沒(méi)有錯(cuò)的，色譜柱受污染時(shí)，我們應(yīng)該先想到儀器也污染了！
9.色譜柱的選擇
如果需要購(gòu)買(mǎi)色譜柱，液相色譜柱，反相柱，正相柱，離子交換柱，等等，或者是需要查看更多關(guān)于液相色譜柱維護(hù)知識(shí)。
MS-Clean?凍存管是由透明高分子材料聚丙烯制成的,經(jīng)特殊工藝制造,使其能耐受超低溫,并保證無(wú)泄露,管體可有清晰準(zhǔn)確得刻度和手寫(xiě)的空白標(biāo)簽,方便記錄,凍存管適用于細(xì)胞和組織的長(zhǎng)期超低溫冷藏。
MS-Clean?凍存管產(chǎn)品特征：
管壁均勻,透明,帶可立裙邊
管提印有準(zhǔn)確的刻度和可寫(xiě)入空白標(biāo)簽區(qū),方便實(shí)驗(yàn)過(guò)程的記錄
精密螺旋蓋,確保液體不外泄，并有效防止液氮的入侵
耐溫范圍：-80。C~121。C
大儲(chǔ)液量為量人刻度的80%
Y射線消毒滅菌
MS-Clean?凍存管產(chǎn)品用途：
冷凍儲(chǔ)藏細(xì)胞,標(biāo)本,溶液:臨床診斷,生物技術(shù)。
藥學(xué)和化學(xué),環(huán)境檢測(cè),食品檢測(cè)。
貨號(hào)
描述
包裝（只/包）
包裝（只/箱）
MS-Clean?凍存管
LBFT18S
凍存管1.8ml,自立式,滅菌
500
11000
LBFT50S
凍存管5.0ml,自立式,滅菌
200
4400
氣相色譜儀無(wú)論在工業(yè)生產(chǎn)過(guò)程還是日常生活中的使用都得到廣泛應(yīng)用，為達(dá)到使用者正確操作和保養(yǎng)，以下關(guān)于***新氣相色譜簡(jiǎn)略的使用方法和說(shuō)明。
1、對(duì)色譜儀分析室的要求
（1）分析室周?chē)坏糜袕?qiáng)磁場(chǎng)，易燃及強(qiáng)腐蝕性氣體。
?。?）室內(nèi)環(huán)境溫度應(yīng)在5~35度范圍內(nèi)，濕度小于等于85%（相對(duì)濕度），且室內(nèi)應(yīng)保持空氣流通。有條件的廠******安裝空調(diào)。
?。?）基本具備好3000x800x600 (長(zhǎng)X寬X高) (mm)的能承受整套儀器，便于操作的工作平臺(tái)。平臺(tái)不能緊靠墻，應(yīng)離墻0.5~1.0米，便于接線及檢修用。
（4）為防止電壓波動(dòng)造成檢測(cè)的干擾應(yīng)裝備單獨(dú)容量在10KVA左右的動(dòng)力線路電源。
2、氣源準(zhǔn)備及凈化
?。?）氣源準(zhǔn)備，事先準(zhǔn)備好需用氣體的高壓鋼瓶（一般大中城市均可購(gòu)到），裝某一種氣體的鋼瓶只能裝這種氣體，每個(gè)鋼瓶的顏色代表一種氣體，不能互換。一般用高純氮?dú)?，高純氫氣，無(wú)油空氣這三種氣體，每種氣體******準(zhǔn)備兩個(gè)鋼瓶，以調(diào)換備用。有的廠使用氮?dú)獍l(fā)生器、氫氣發(fā)生器和空氣壓縮機(jī)也可，但空壓機(jī)必須無(wú)油。凡鋼瓶氣壓下降到1~2Mpa時(shí)，應(yīng)更換氣瓶。一般廠家使用使用以上氣體99.99%即可，如氣相色譜儀配備電子捕獲檢測(cè)器******使用鋼瓶高純氣源，純度在99.999%以上。
?。?）氣源凈化為了出去各種氣體中可能含有的水分，灰分和有機(jī)氣體成分，在氣體進(jìn)入儀器之前應(yīng)先經(jīng)過(guò)嚴(yán)格凈化處理?，F(xiàn)在國(guó)內(nèi)的氣體發(fā)生器具有較高的發(fā)展技術(shù)，一般配置分子篩或活性炭過(guò)濾凈化裝置，基本可以滿足氣相色譜儀要求。若使用鋼瓶高純氣體，則需要進(jìn)行凈化過(guò)濾后使用。對(duì)一些的色譜儀附有凈化器，且內(nèi)已填有分子篩，活性炭，硅膠，基本可滿足要求。
3、氣相色譜儀成套性檢查及安放
儀器開(kāi)箱后，按資料袋內(nèi)附件清單，進(jìn)行逐項(xiàng)清點(diǎn)，并將易損零件的備件予以妥善保存。然后按照儀器的使用說(shuō)明書(shū)上要求，將其放置于工作平臺(tái)上，并對(duì)著接線圖和各插頭，插座將儀器各部分連接起來(lái)，***后連接色譜工作站。
4、色譜儀氣路連接和氣路氣密性檢查
對(duì)于氣相色譜儀氣路鏈接一般由色譜儀生產(chǎn)廠家工程技術(shù)人員進(jìn)行，在無(wú)法達(dá)到滿足的情況下應(yīng)嚴(yán)格按照使用說(shuō)明書(shū)中要求在專(zhuān)業(yè)人員指導(dǎo)下安裝連接。
氣密性檢查是一項(xiàng)十分重要的工作，若氣路有漏，不僅直接導(dǎo)致儀器工作不穩(wěn)定或靈敏度下降，而且還有發(fā)生泄漏的危險(xiǎn)，特別是氫氣更應(yīng)該加以重視。氣相色譜儀氣密檢查一般是檢查載氣流路，其重點(diǎn)是管路接頭處，對(duì)于氫氣和空氣流路也要做相應(yīng)的檢查。
液相色譜儀作為一種分離技術(shù)和方法，目前已經(jīng)發(fā)展到一個(gè)全新的階段。高精度的輸液泵，應(yīng)用廣泛的色譜分離柱，低噪音、高靈敏度的各種檢測(cè)器和功能強(qiáng)大的數(shù)據(jù)處理軟件系統(tǒng)的出現(xiàn)，都推動(dòng)了液相色譜技術(shù)的迅猛發(fā)展。液相色譜儀正以它分辨率高、分析速度快和應(yīng)用廣泛的優(yōu)點(diǎn)倍受儀器分析工作者的青睞，廣泛地應(yīng)用于醫(yī)藥衛(wèi)生、環(huán)境監(jiān)測(cè)、食品檢測(cè)等領(lǐng)域。
應(yīng)用HPLC技術(shù)在血藥濃度、生物胺、核苷酸、蛋白質(zhì)濃度測(cè)定等實(shí)際工作中，積累了許多的方法和經(jīng)驗(yàn)，在這里與大家交流，希望能對(duì)同行們有所幫助和借鑒，共同促進(jìn)液相色譜分析技術(shù)的發(fā)展。
液相色譜儀使用過(guò)程中常見(jiàn)問(wèn)題分析
（一）液相色譜柱柱壓?jiǎn)栴}
液相色譜柱壓過(guò)高，導(dǎo)致這種情況的直接原因可能是液相色譜柱或進(jìn)樣器流動(dòng)不暢通。出現(xiàn)這種情況的根本原因可能是流動(dòng)相抽濾不干凈，存有雜質(zhì)，從而堆積在色譜柱或過(guò)濾器中，這時(shí)只要重新配置一遍流動(dòng)相。解決“堵”的方法就是檢查色譜分離柱，確定其流動(dòng)是否暢通，具體操作是在泵工作的情況下將色譜柱的出口處擰開(kāi)，看看是否有流動(dòng)相流出，同時(shí)可以調(diào)節(jié)流速，觀察流動(dòng)相流出的流量，進(jìn)而判斷色譜柱是否堵了。還有一些原因，比如：流動(dòng)相的流速過(guò)大（一般為1.0ml/min）、流動(dòng)相的成分不符合標(biāo)準(zhǔn)（沒(méi)有使用HPLC級(jí)別的試劑或者沒(méi)有超聲*）等。這些按照藥典調(diào)整成正確的設(shè)置即可。如果懷疑是在線過(guò)濾器堵了可以關(guān)閉排液閥，斷開(kāi)出口管路，設(shè)定流速為1ml/min，如壓力>3kgf/cm2，則可能堵塞，可以考慮將其置于5%稀硝酸，超聲波清洗一段時(shí)間。***后******在檢測(cè)驗(yàn)樣品的時(shí)候加一個(gè)保護(hù)柱。有時(shí)候也會(huì)柱壓過(guò)低，發(fā)生這個(gè)原因主要是連接不牢固，導(dǎo)致漏液，擰緊即可。更換流動(dòng)相時(shí)沒(méi)有進(jìn)行脫氣，導(dǎo)致儀器里面進(jìn)入空氣，一般的解決方法就是卸下超聲清洗，然后進(jìn)行脫氣。
（二）基線漂移
在液相色譜儀啟動(dòng)之前，通常先啟動(dòng)半個(gè)小時(shí)后再進(jìn)行操作，這樣做是避免基線漂移。出現(xiàn)這種現(xiàn)象的原因很多，其一是色譜柱溫差變化大，需要控制柱溫，用色譜純，也可多抽濾幾次，除去醇溶性流動(dòng)相外的其他流動(dòng)相要勤更換，做到現(xiàn)配現(xiàn)用，以免滋生微生物，堵塞進(jìn)樣通道，造成基線不穩(wěn)定，影響出峰。第三個(gè)原因是流路本身長(zhǎng)期進(jìn)樣沒(méi)有時(shí)間保養(yǎng)積淀的雜質(zhì)。解決方法是用洗脫劑沖洗樣品流動(dòng)的通道，對(duì)于反相色譜系統(tǒng)的流動(dòng)相******甲醇-水系統(tǒng)，按照梯度洗脫的方法沖洗掉系統(tǒng)和色譜柱中的雜質(zhì)，以免影響樣品的質(zhì)量。必要時(shí)可以用異丙醇。第四個(gè)可能性就是由于紫外燈的使用壽命到了，不能再繼續(xù)工作，解決方法是換紫外燈。***后是樣品本身性質(zhì)的影響，對(duì)于流動(dòng)相的影響較大，解決方法就是用保護(hù)柱檢測(cè)樣品，以免出現(xiàn)問(wèn)題。
離子色譜儀可廣泛應(yīng)用于環(huán)境連續(xù)檢測(cè)、生產(chǎn)過(guò)程連續(xù)檢測(cè)等領(lǐng)域，該產(chǎn)品針對(duì)離子色譜法的在線檢測(cè)問(wèn)題，進(jìn)行了離子色譜法的在線檢測(cè)方法及檢測(cè)工藝、色譜數(shù)據(jù)的在線自動(dòng)處理、產(chǎn)品的檢測(cè)能力及檢測(cè)精度等方面的研究，技術(shù)屬集成創(chuàng)新，其技術(shù)創(chuàng)新點(diǎn)主要體現(xiàn)在：
1、設(shè)計(jì)了離子色譜法的在線檢測(cè)流程，并采用嵌入式系統(tǒng)，實(shí)現(xiàn)了三通道并行全自動(dòng)檢測(cè)。
2、采用電導(dǎo)法的在線檢測(cè)工藝及數(shù)據(jù)自動(dòng)處理技術(shù)，可同時(shí)自動(dòng)檢測(cè)陰離子F-、Cl-、NO2-、PO43-、Br-、NO3-、SO42-和陽(yáng)離子Li、Na、NH4、K、Ca2、Mg2。3、創(chuàng)新性地提出了流動(dòng)伏安檢測(cè)方法，實(shí)現(xiàn)了重金屬離子Cu2、Zn2、Pb2、Cd2的在線檢測(cè)。
離子色譜柱的維護(hù)：
1、進(jìn)入色譜柱的樣品，均需要對(duì)其進(jìn)行前處理。樣品中固體懸浮物、有機(jī)物和重金屬是影響色譜柱柱效的三大因素。
固體懸浮物的消除：使用0.45或0.22微米孔徑的微孔濾膜將樣品過(guò)濾即可。
有機(jī)物：固態(tài)樣品，其各檢測(cè)組份對(duì)高溫仍比較穩(wěn)定的，可以采用高溫灰化-淋洗液或去離子水浸取法將有機(jī)，離子色譜儀直接IC檢測(cè)。
液態(tài)樣品，可以采用22%雙氧水微波消解1.5h除去有機(jī)物后調(diào)節(jié)PH至中性，直接IC進(jìn)樣檢測(cè)。(注意溶液濃度之間的換算)
重金屬：可以將樣品流經(jīng)陽(yáng)離子交換樹(shù)脂除去重金屬后直接IC進(jìn)樣。
2、組份高含量樣品影響離子色譜柱柱效。
高Cl樣品的處理：將樣品通過(guò)Ag處理柱將Cl-除去后進(jìn)樣或稀釋后進(jìn)樣分析。
高SO42樣品的處理：將樣品通過(guò)Bs處理柱將SO42-除去后進(jìn)樣或稀釋后進(jìn)樣分析。
3、實(shí)驗(yàn)操作完畢，離子色譜柱用淋洗液密封保存。
離子色譜是液相色譜的一種，故又稱(chēng)離子色譜（HPIC）或現(xiàn)代離子色譜，其有別于傳統(tǒng)離子交換色譜柱色譜的主要是樹(shù)脂具有很高的交聯(lián)度和較低的交換容量，進(jìn)樣體積很小，用柱塞泵輸送淋洗液通常對(duì)淋出液進(jìn)行在線自動(dòng)連續(xù)電導(dǎo)檢測(cè)。離子色譜法是液相色譜法中分離分析溶液中離子組分的方法。離子色譜中使用的固定相是離子交換樹(shù)脂。離子交換樹(shù)脂上分布有固定的帶電荷的基團(tuán)和能游動(dòng)的配位離子。
在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中經(jīng)常遇到的情況：
新的氣相色譜柱，直接上分析條件來(lái)分析樣品，發(fā)現(xiàn)分離情況不穩(wěn)定。
新的氣相色譜柱，使用中發(fā)現(xiàn)壓力突然升高。
新的氣相色譜柱，發(fā)現(xiàn)分離度、保留時(shí)間發(fā)生了變化。
氣相色譜柱使用不頻繁，一開(kāi)始分析樣品效果比較好，但是，在使用過(guò)程中發(fā)現(xiàn)柱效下降快、峰形異常的情況。
氣相色譜峰形異常，基線不穩(wěn)。
當(dāng)發(fā)生以上情況，請(qǐng)仔細(xì)檢查，是否有某個(gè)操作疏忽了？
1)測(cè)試柱性能
通常情況下，我們建議用戶(hù)在拿到氣相色譜柱后，******件事情就是在一臺(tái)性能完好的儀器系統(tǒng)上，按照廠家說(shuō)明書(shū)對(duì)氣相色譜柱進(jìn)行柱效測(cè)試。其實(shí)，對(duì)于一個(gè)合格的色譜分析工作者來(lái)說(shuō)，拿到一根新色譜柱，要開(kāi)始一個(gè)課題之前，都會(huì)這樣做，目的有二：一、了解氣相色譜柱之前的情況并判斷色譜柱是否正常。二、將檢測(cè)結(jié)果小心保存，當(dāng)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)異常時(shí)，在檢測(cè)柱效進(jìn)行對(duì)比，來(lái)進(jìn)一步排查原因。
2)當(dāng)反相使用高濃度緩沖鹽時(shí)，注意過(guò)渡
在使用高濃度的鹽或緩沖液作洗脫劑時(shí)，一定要注意應(yīng)先用10％左右的低濃度的有機(jī)相洗脫劑過(guò)渡一下，否則緩沖液中的鹽在高濃度的有機(jī)相中很容易析出，造成系統(tǒng)堵塞。另外，在發(fā)現(xiàn)系統(tǒng)壓力升高異常時(shí)，要仔細(xì)檢查，段段排除包括保護(hù)柱、混合器、管路或者流通池等。氣相色譜柱的維護(hù)和保養(yǎng)
3)當(dāng)更換氣相色譜柱時(shí)，原來(lái)的實(shí)驗(yàn)情況發(fā)生變化.
首先，如果之前開(kāi)發(fā)方法時(shí)色譜柱已經(jīng)做過(guò)別的樣品，那么之前的樣品或使用的流動(dòng)相對(duì)這個(gè)樣品分析可能有干擾，只能重新找條件。建議：開(kāi)發(fā)方法時(shí)使用新的氣相色譜柱。(其次，如果是更換了品牌發(fā)生這樣的情況，可能是由于不同品牌的鍵合技術(shù)不同，造成了選擇性的細(xì)微差異 ，需要調(diào)整條件，并再次確定出峰順序(有些樣品的洗脫順序會(huì)改變)。
再次，如果是更換了同品牌型號(hào)的新的氣相色譜柱發(fā)生這種情況，請(qǐng)檢查之前分離時(shí)目標(biāo)與雜質(zhì)的分離度是否符合要求(Rs大于1.5)，如果一開(kāi)始只是勉強(qiáng)分開(kāi)(Rs小于1.5)，那只能說(shuō)明方法沒(méi)有優(yōu)化好，需要再次進(jìn)行優(yōu)化。色譜柱的維護(hù)和保養(yǎng)
4)樣品及前處理
樣品要盡可能清潔，可選用樣品過(guò)濾器或樣品預(yù)處理柱(S)對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)處理；若樣品不便處理，要使用保護(hù)柱。流動(dòng)相中所使用的各種有機(jī)溶劑要使用色譜純，配流動(dòng)相的水******是超純水或雙蒸水。如果將所配得流動(dòng)相再經(jīng)過(guò)0.45μm的濾膜過(guò)濾一次則更好，尤其是含鹽的流動(dòng)相。另外，裝流動(dòng)相的容器和色譜系統(tǒng)中的在線過(guò)濾器等裝置應(yīng)該定期清洗或更換。
5)氣相色譜柱基線問(wèn)題
通常情況，基線問(wèn)題是由于系統(tǒng)或者流動(dòng)相引起的，和色譜柱關(guān)系不大。
可能導(dǎo)致的原因：
(1)泵頭進(jìn)氣泡
(2)系統(tǒng)污染
(3)流通池漏液
(4)流動(dòng)相使用的某成分易揮發(fā)不穩(wěn)定(檢測(cè)波長(zhǎng)不合適)
(5)檢測(cè)波長(zhǎng)低，水的質(zhì)量不好等等。
6)KB氣相色譜柱沖洗保養(yǎng)
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